Efecto de la criopreservación en fragmentación del ADN, viabilidad, motilidad y cinética espermática en toros Brown Swiss empleando sistema casa

Abstract

El objetivo de esta investigación fue evaluar el efecto de la criopreservación espermática en la fragmentación del ADN, la viabilidad, y cinética espermática, mediante el sistema computarizado de análisis seminal (CASA), se colectaron 5 toros de la raza Brown Swiss ubicados en el Banco Nacional de Semen de la UNALM, se procesó y congelo los 76 eyaculados obtenidos. Para el análisis de la fragmentación del ADN se utilizó el Kit Sperm-Halomax® y para el análisis de la viabilidad espermática la tinción Hoeschst 333242/PI, se evaluó si existió un cambio significativo entre los valores antes y después de la criopreservación para cada uno de los parámetros seminales evaluados utilizando la prueba T de muestras relacionadas, previa verificación de normalidad con la prueba de Shapiro-Wilk en caso que los datos fueran no normales, se utilizó la prueba de rangos con signo de Wilcoxon. Se aplicó ajuste de Bonferroni para las comparaciones antes mencionadas. Todos los análisis se realizaron considerando 5 réplicas biológicas en el paquete estadístico SPSS v.23 con un 95% de confiabilidad. Se encontraron diferencias significativas en 16 de los 21 parámetros evaluados, se evidencio un aumento de la fragmentación del ADN del 3%, en el parámetro de viabilidad espermática se manifestó una disminución de los valores analizados. Se observó la disminución de los valores de los siguientes parámetros motilidad, motilidad progresiva, motilidad rápida, al igual que los parámetros cinéticos VCL, VSL, VAP, DSL, DAP, ALH, BCF, HAC, STR, y un incremento en los valores de motilidad local y espermatozoides inmóviles, atribuidos al efecto de la criopreservación seminal.

The objective of this research was to evaluate the effect of sperm cryopreservation on DNA fragmentation, viability and sperm kinetics using the computer-assisted semen analysis (CASA), 5 bulls of the Brown Swiss breed located in the National Semen Bank of the UNALM were collected, we proceeded to collect, process and freeze the 76 ejaculates obtained. For the analysis of DNA fragmentation the Sperm-Halomax® Kit was used and for the analysis of the sperm viability Hoeschst 333242 / PI stain, it was evaluated if there was a significant change between the values before and after the cryopreservation for each one of the seminal parameters evaluated using the T test of related samples, after verification of normality with the Shapiro-Wilk test in case the data were not normal, the Wilcoxon signed rank test was used. The Bonferroni adjustment was applied for the referred above comparisons. All the analyzes were made considering 5 biological replicas in the statistical package SPSS v.23 with a 95% reliability. Significant differences were found in 16 of the 21 parameters evaluated, an increase in DNA fragmentation of 3% was evidenced, in the sperm viability parameter a decrease in the analyzed values was manifested. The decrease in the values of the following parameters motility, progressive motility, rapid motility was observed, as were the kinetic parameters VCL, VSL, VAP, DSL, DAP, ALH, BCF, HAC, STR, and an increase in the values of local motility and immobile sperm, attributed to the effect of seminal cryopreservation.