Efecto antagónico de bacterias ácido lácticas aisladas de Tocosh sobre Listeria innocua

Abstract

El tocosh como producto fermentado obtenido tradicionalmente por una técnica de conservación andina y que tiene propiedades nutritivas y terapéuticas, aún es producido principalmente por las poblaciones en las regiones centrales del Perú (Ancash, Huánuco y Junín) y que además es fuente de cepas de bacterias ácido lácticas (BAL) con alto potencial biotecnológico. Las BAL son microorganismos de grado alimenticio y, por lo tanto, una buena alternativa a los productos químicos que se aplican en la conservación de alimentos. Listeria monocytogenes posee una estrecha relación genética con Listeria innocua, es por esto que L. innocua es una opción, para pruebas in vitro, como sustituto no patogénico de L. monocytogenes. Así, el presente trabajo tiene como objetivo determinar el efecto antagónico in vitro de las BAL aisladas de tocosh frente a L. innocua. Se realizó el aislamiento de las probables BAL de muestras de extracto de tocosh, provenientes del banco de muestras del Laboratorio de Ecología Microbiana y Biotecnología “Marino Tabusso” de la Universidad Nacional Agraria la Molina a 28 °C en medio MRS. Estos fueron caracterizados bioquímica y morfológicamente obteniendo 435 colonias las cuales resultaron catalasa negativas, KOH negativas y Gram positivas, encontrandose una predominancia de forma bacilar con 75.4 % seguido de cocobacilo 17.47 % y coco 7.13 %. El sobrenadante libre de células de sólo dos cepas aisladas, 2TH03-BL12 y 2TH03-BL13, presentaron efecto antagónico frente a L. innocua. Las sustancias antagónicas producidas por estas dos BAL son termoestables y sus actividades no se ven afectadas por la neutralización ni por la eliminación del efecto del H2O2 (p > 0.05), sin embargo, las actividades se ven afectadas por la presencia de proteasas como la proteinasa K, proteinasa de Streptomyces, α-quimiotripsina y tripsina (p < 0.05). Estas sustancias producidas por 2TH03-BL12 y 2TH03-BL13 alcanzan sus niveles máximos a las 12 y 48 horas de incubación a 28 °C en caldo MRS, respectivamente. Además, las dos cepas aisladas, 2TH03-BL12 y 2TH03-BL13, presentaron una identidad del 98.15 % y 98.70 % a Lactobacillus brevis ATCC 14869T respectivamente.

The “Tocosh” is a fermented product traditionally obtained by Andean conservation techniques that has nutritional and therapeutic properties. It is still produced mainly by populations in the central regions of Peru (Ancash, Huánuco and Junín) and it is also a source of Lactic acid bacteria (LAB) strains with high biotechnological potential. LABs are highly food graded microorganisms, and therefore, a good alternative to chemicals used in food preservation. Listeria monocytogenes has a close genetic relationship with Listeria innocua. Accordingly, L. innocua is an option for in vitro tests as a non-pathogenic substitute for L. monocytogenes. Thus, the present work aims to determine the in vitro antagonistic effect of BALs isolated from tocosh against L. innocua. The isolation of the probable LABs from tocosh extract samples was performed at 28 °C in MRS medium. These samples came from the "Marino Tabusso" Microbial Ecology and Biotechnology Laboratory from La Molina National Agrarian University sample bank. These LABs were biochemically and morphologically characterized obtaining 435 colonies which were catalase negative, KOH negative and Gram positive, finding a predominance of bacillary form with 75.4% followed by cocobacillus 17.47% and coconut 7.13%. The cell-free supernatant obtained by only two isolated strains, 2TH03-BL12 and 2TH03-BL13, showed an antagonistic effect against L. innocua. The antagonistic substances produced by these two LABs are thermostable and their activities are not affected by neutralization or elimination of the H2O2 effect (p > 0.05). However, the activities were affected by the presence of proteases such as proteinase K, Streptomyces proteinase, α-chymotrypsin and trypsin (p < 0.05). These substances produced by 2TH03-BL12 and 2TH03-BL13 reach their maximum levels at 12 and 48 hours of incubation at 28 °C in MRS broth, respectively. Furthermore, the two isolated strains, 2TH03-BL12 and 2TH03-BL13, presented a 98.15% and 98.70% of identity, respectively to Lactobacillus brevis ATCC 14869T .