Momento de blastulación para seleccionar embriones viables monitoreada por tecnología Time - Lapse

Abstract

Tradicionalmente, la selección de embriones bovinos para transferencia se basa en sus características morfológicas por ser simple y rápido, sin embargo, los valores cualitativos tienen una baja precisión para predecir competencia embrionaria. Por lo tanto, es necesario incluir medidas de características objetivas y no invasivas como el tiempo de blastulación, para incrementar la precisión del método de selección. El objetivo de este estudio fue evaluar el momento de blastulación monitoreada por tecnología time-lapse para seleccionar embriones con viabilidad in vitro determinada por desarrollo post eclosión. Los complejos de ovocitos cumulus (COCs) se maduraron durante 23 horas y luego se fertilizaron mediante la incubación de COCs con espermatozoides (10.000 espermatozoides por ovocito) durante 18 horas. Los presuntos cigotos se colocaron individualmente en micropocillos, en gotas de medio de cultivo comercial. El sistema Primo Vision TL (EVO+; Vitrolife, Gotemburgo, Suecia) capturó imágenes digitales de embriones en desarrollo cada 15 minutos. Se registraron los periodos de tiempo desde la FIV hasta el inicio de la blastulación (tSB) y el desarrollo del blastocisto (tB). La viabilidad in vitro de los embriones se determinó utilizando un sistema de cultivo in vitro extendido de embriones bovinos hasta el día 9,5 (desarrollo posterior a la eclosión). Los parámetros para establecer la viabilidad in vitro (día 9,5 después de la FIV) fueron: diámetro superior a 200 μm y recuento total de células de blastocisto superior a 190. Para determinar el poder predictivo de la blastulación temprana (valor 1) o tardía (valor 0) se estimaron mediante el área bajo la curva ROC (AUC). Además, se utilizó análisis de regresión logística binaria para generar un modelo matemático con variables morfocinéticas que permite la más alta predicción de la viabilidad in vitro. En 13 sesiones, la tasa de producción de blastocistos ascendió a 46,2% (96/208). El punto de corte del tiempo para discriminar como blastulación temprana o tardía fue de 149.8 h. La viabilidad in vitro de los embriones con blastulación temprana fue de 63,3 % (31/49), siendo superior estadísticamente (p=0,001) al grupo de blastulación tardía 14,9% (7/47). Asimismo, el momento de blastulación mostró una precisión del 90,8 % (IC 95 %, 0,833–0,983; P < 0,001) para predecir la viabilidad in vitro. En conclusión, el tiempo de blastulación permite predecir la viabilidad in vitro del embrión bovino.

Traditionally, the selection of bovine embryos for transfer is based on their morphological characteristics, as it is simple and fast, however, qualitative values have a low precision to predict embryonic competence. Therefore, it is necessary to include measurements of objective and non-invasive traits to increase the accuracy of the selection method. The objective of this study was to evaluate the moment of blastulation monitored by time-lapse technology to select embryos with in vitro viability determined by post-hatching development. Cumulus oocyte complexes were matured for 23 hours and then fertilized by incubating COCs with sperm (10,000 sperm per oocyte) for 18 hours. Presumptive zygotes were placed individually in microwells, in droplets of commercial culture medium. The Primo Vision TL system (EVO+; Vitrolife, Gothenburg, Sweden) captured digital images of developing embryos every 15 minutes. The time frame from IVF to the start of blastulation (tSB) and to blastocyst development (tB) were recorded. Viable embryos were determined using an in vitro extended bovine embryo culture system up to day 9.5 (post-hatching development). The parameters to establish in vitro viability (day 9.5 after IVF) were: a diameter greater than 200 μm and a total blastocyst cell count greater than 190. To determine the predictive power of early (value 1) or late blastulation (value 0) the areas under the ROC curve (AUC) were estimated. In addition, binary logistic regression analysis was used to generate a mathematical model with morphokinetic variables that allow the best prediction of in vitro viability. In 13 sessions, the blastocyst production rate was 46.2% (96/208). The time cut-off point to discriminate as early or late blastulation was 149.8 h. The in vitro viability of the embryos with early blastulation was 63.3% (31/49), being statistically superior (p=0.001) to the late blastulation group 14.9% (7/47). Likewise, the time of blastulation showed an accuracy of 90.8% (95% CI, 0.833–0.983; P < 0.001) in predicting in vitro viability. In conclusion, the blastulation time allows predicting the in vitro viability of the bovine embryo.